血小板中含有很多不同的細(xì)胞生長因子，包括PDGF, VEGF，EGF等，存在血小板顆粒中的大量生長因子和細(xì)胞因子可以通過凝血酶激活和凝固自然釋放，也可以通過冷凍/解凍介導(dǎo)的血小板溶解、超聲或化學(xué)治療人工釋放。以不同的釋放策略制備的人血小板裂解物被視為可以替代胎牛血清（FBS）作為培養(yǎng)基補充劑的合適選擇，使人類細(xì)胞在無動物血清條件下高效增殖，在體細(xì)胞治療和組織工程中具有廣泛的應(yīng)用前景。

 

血小板裂解物的制備方法有哪幾種？

 

誘導(dǎo)血小板釋放生長因子和其他生物活性分子的四大方法：

 

（1）多次冷凍/解凍循環(huán)（反復(fù)凍融法）：

 

多次冷凍/解凍循環(huán)是常見的簡單有效和經(jīng)濟(jì)的方式誘導(dǎo)血小板激活釋放因子。典型的情況是，濃縮的血小板在-80℃時被休克冷凍，37℃時解凍，從而使血小板激活和碎裂。

 

（2）直接激活法:

 

這種方法是加入鈣鹽溶液(通常是CaCl2)，以激活內(nèi)源性凝血酶，從而纖維蛋白形成和血小板脫顆粒。也有人或重組凝血酶的直接激活，但重組凝血酶的使用可能會使HPL用于細(xì)胞治療的監(jiān)管和批準(zhǔn)復(fù)雜化。

 

（3）聲波降解法:

 

多年來，超聲單獨或與冷凍/解凍循環(huán)相結(jié)合也被用作一種快速、高效和經(jīng)濟(jì)高效的釋放血小板的方法。在20kHz頻率下超聲作用30分鐘可有效釋放血小板顆粒含量。

 

（4）溶劑/洗滌劑 (S/D)處理:

 

從制備工藝上來說，S/D處理法略微復(fù)雜。用1%磷酸三丁酯(TNBP)和1%的TritonX-100在30℃下處理新鮮冷凍血漿（FFP）4小時，制備S/D-FFP。添加的試劑用大豆油萃取和不溶性C18樹脂層析除去。用S/D-FFP免疫家兔，然后用未經(jīng)處理的FFP吸附誘導(dǎo)的抗體，證實沒有新的免疫原的形成。這種方法還有一個好處就是可以滅活被脂質(zhì)包裹的病毒。